流式檢測細胞內鈣離子濃度

簡要描述：流式檢測細胞內鈣離子濃度流式細胞術測量鈣離子的熒光探針大都是鈣螯合劑EDTA的衍生物，有較高的量子產量，并對鈣有較高的特異性親合力。鈣離子流式熒光探針本身不能透過細胞質膜進入細胞內，將它們連潔乙酰甲酯后，可將染料導入細胞，經細胞內的非特異性酯酶水解水解該酯鍵，釋放出染料分子，恢復為不能通過細胞膜的游離酸形式，進而與細胞內鈣結合。通過熒光強度可以敏感地檢測出鈣離子濃度。

更新時間：2026-03-20
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1.Fluo/Am儲存液配制：將Fluo/Am溶于DMSO，配成終濃度為2mmol/L的儲存液，分裝，-70度凍存。
2.懸浮細胞染色：收集細胞并調整細胞濃度至2*10^6個/ml，加Fluo/Am至終濃度為5-10umol/L,置于，5%CO2。37度避光，孵育30-60min，其間輕輕振蕩幾次，并設置陰性對照（不加Fluo/Am）。
3.貼壁細胞染色：以5*10^5個細胞種植于24孔培養板中，置于5%CO2。37度培養一段時間，加入Fluo/Am至終濃度為5-10umol/L，置于5%CO2。37度避光，孵育30-60min。其間輕輕振蕩幾次，并設置陰性對照。
4.取出細胞或消化細胞，離心1500r/min 10min，去除多余染料，再用無鈣緩沖液沖洗PBS反復離心洗滌2次，用無鈣PBS重懸至0.5ml。
5.進行流式檢測分析
結果分析：用488mm激發，FLI-H熒光通道收集熒光信號，收集1*10^4個細胞，細胞內鈣的濃度用平均熒光表示。

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