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流式檢測實驗服務

簡要描述：流式檢測實驗服務是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位△Ψm的理想熒光探針。可以檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時，Jc-1聚集在線粒體的基質中，形成聚合物，可以產生紅色熒光;在線粒體膜電位較低時，JC-1不能聚集在線粒體的基質中，此時Jc-1為單體，可以產生綠色熒光。

更新時間：2026-03-20
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一、細胞周期檢測（PI 單染）

原理：PI 嵌入 DNA，熒光強度反映 DNA 含量，分 G0/G1、S、G2/M 期
用途：藥物對細胞增殖、周期阻滯的影響

簡要步驟

細胞消化、70% 乙醇 4℃ 固定過夜
PBS 洗，加 RNase A 37℃孵育
加 PI 染色，避光 30min
上機檢測，Modfit 或 FlowJo 分析周期分布

論文寫法

細胞經不同處理后，70% 冰乙醇固定，RNase 消化后 PI 染色，流式細胞儀檢測 DNA 含量，分析細胞周期各時期分布比例。

二、細胞凋亡檢測（Annexin V-FITC/PI 雙染）

原理：凋亡早期膜外翻結合 Annexin V，晚期壞死 PI 入核
結果：Q3 正常，Q4 早期凋亡，Q2 晚期凋亡 / 壞死

步驟

收集細胞（上清 + 貼壁一起收）
Binding buffer 重懸
加 Annexin V 和 PI，避光 15min
上機，1h 內完成

論文寫法

采用 Annexin V-FITC/PI 雙染法檢測細胞凋亡，流式細胞儀分析早期凋亡率與總凋亡率。

三、ROS 活性氧檢測

探針：DCFH-DA
熒光：綠色熒光強度 ∝ ROS 水平

步驟

細胞加 DCFH-DA，37℃ 孵育 20–30min
洗細胞，流式上機測綠色熒光

論文寫法

以 DCFH-DA 為熒光探針檢測細胞內 ROS 水平，流式細胞儀測定平均熒光強度以反映 ROS 相對含量。

四、線粒體膜電位（MMP）

探針：JC-1
紅綠熒光比：紅色↓、綠色↑ → 膜電位下降（凋亡相關）

論文寫法

采用 JC-1 染色檢測線粒體膜電位，流式分析紅綠熒光比值變化。

五、細胞表面標志物 / 蛋白表達

如：CD44、CD133、Nestin、Ki67、α-SMA、緊密連接蛋白等

一抗直接 / 間接標記熒光
設同型對照

論文寫法

細胞經固定破膜（或活細胞）后，熒光標記抗體避光染色，流式檢測陽性細胞比例及平均熒光強度。

六、鈣離子濃度（Ca2?）

探針：Fluo-3/AM、Fura-2

多用于神經元、心肌細胞、內皮細胞

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流式檢測實驗服務

一、細胞周期檢測（PI 單染）

二、細胞凋亡檢測（Annexin V-FITC/PI 雙染）

三、ROS 活性氧檢測

四、線粒體膜電位（MMP）

五、細胞表面標志物 / 蛋白表達

六、鈣離子濃度（Ca2?）

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