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免疫沉淀實驗服務(wù)

簡要描述:免疫沉淀實驗服務(wù)是一種純化目的蛋白質(zhì),及抗原或抗體定性檢測的常用方法。其基本原理基于“抗原-抗體"免疫反應(yīng),在蛋白提取液中加入某抗原特異的抗體,形成“抗原-抗體"的免疫復(fù)合物后,再與和免疫球蛋白(抗體)有高親和性的Protein A/G beads孵育,純化免疫復(fù)合物。

  • 更新時間:2026-03-20
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 訪  問  量:1979

詳細(xì)介紹

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一、定義

Immunoprecipitation,IP
用特異性抗體將細(xì)胞內(nèi)某個目標(biāo)蛋白從總蛋白中 “抓取" 并富集出來,用于后續(xù)檢測。
和 Co-IP 區(qū)別:
  • IP:富集單個目標(biāo)蛋白

  • Co-IP:富集蛋白復(fù)合物,檢測相互作用


二、主要用途

  • 富集低豐度蛋白,方便 Western blot 檢測

  • 檢測蛋白磷酸化、泛素化、乙酰化等修飾

  • 純化蛋白用于質(zhì)譜、酶活實驗

  • 驗證抗體特異性


三、實驗流程(標(biāo)準(zhǔn))

  1. 細(xì)胞裂解

    非變性 / 溫和變性裂解液,加蛋白酶 / 磷酸酶抑制劑

  2. 預(yù)清除

    加 Protein A/G 磁珠,減少非特異結(jié)合

  3. 免疫沉淀

    目標(biāo)蛋白一抗,4℃ 孵育過夜

  4. 結(jié)合磁珠

    加 Protein A/G 磁珠,4℃ 結(jié)合 2–4 h

  5. 洗滌

    洗 3–4 次,去除雜蛋白

  6. 洗脫

    上樣緩沖液煮沸,做 Western blot 或質(zhì)譜


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