流式鈣離子濃度檢測(cè)技術(shù)服務(wù)

簡(jiǎn)要描述：流式鈣離子濃度檢測(cè)技術(shù)服務(wù)：Fluo-3-Am為一新型的高度特異性Ca2+熒光指示劑，可以靈敏地反映細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的變化，F(xiàn)luo-3-Am進(jìn)入細(xì)胞后經(jīng)非特異性酯酶脫去Am酯，成為脂溶的Fluo-3留在細(xì)胞內(nèi)，當(dāng)Fluo-3與細(xì)胞內(nèi)游離鈣結(jié)合后，其熒光強(qiáng)度是Fluo-3本身的40倍以上，當(dāng)用480nm波長(zhǎng)激發(fā)時(shí)，其熒光強(qiáng)度與游離鈣離子濃度成正比。

更新時(shí)間：2026-03-20
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流式鈣離子濃度檢測(cè)技術(shù)服務(wù)1、鈣熒光探針負(fù)載;取細(xì)胞懸液，加Fluo-3-Am至10umol/L，置二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育1h，其間輕微振蕩3次。離心，去掉多余的染料，再用無(wú)鈣緩沖液反復(fù)洗滌3次，用無(wú)鈣緩沖液稀釋。

2、隨機(jī)測(cè)定每管細(xì)胞懸液樣品(以下簡(jiǎn)稱(chēng)樣品)的單個(gè)細(xì)胞的熒光強(qiáng)度，記為F值，

3、加入10%TritonX100，(破膜用):加入1mmol兒氯化鈣，吹打均勻，解育1~10min.測(cè)定熒光即Fmax佰

4、加入EDTA，20ul(鈣鰲合劑)，孵育1~10min，激發(fā)波長(zhǎng)488nm測(cè)定熒光.即Fmin值，加0.1%friton是增加膜通透性使細(xì)胞外Ca2+進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，作為值。加EGTA是為了螯合Ca2+，作為小值生理環(huán)境中細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度遠(yuǎn)低干細(xì)胞外液(大約1:10000)，細(xì)胞膜對(duì)鈣的通透性變化對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣影響很大流式細(xì)胞術(shù)是一種高靈敏度的自動(dòng)分析細(xì)胞的，快速而地檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞是它的一大特點(diǎn)，用流式細(xì)胞術(shù)可以擯棄原子吸收光譜法測(cè)定組織鈣不能區(qū)別細(xì)胞內(nèi)外Ca2+含之不足，也不似其他方法操作過(guò)干繁雜，由干流式細(xì)胞術(shù)一次測(cè)量細(xì)胞數(shù)量大，故測(cè)定結(jié)果較為，誤差小。更由于在活的細(xì)胞中進(jìn)行測(cè)定，極有助于生命科學(xué)中Ca2+的研究，

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