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細(xì)胞增殖-MTT法實(shí)驗(yàn)

簡(jiǎn)要描述:細(xì)胞增殖-MTT法實(shí)驗(yàn)作為自然科學(xué)的重要分支,生物整體科研涵蓋基礎(chǔ)生物研究與應(yīng)用生物研究?jī)纱蟀鍓K,核心使命是揭示生命本質(zhì)、調(diào)控生命活動(dòng)、改造自然,其研究成果廣泛滲透到醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)、環(huán)保、能源等多個(gè)領(lǐng)域,尤其在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,為疾病機(jī)制研究、新型診療技術(shù)研發(fā)、藥物創(chuàng)新等提供了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和技術(shù)支撐,是連接基礎(chǔ)生物研究與臨床醫(yī)療實(shí)踐的關(guān)鍵橋梁。

  • 更新時(shí)間:2026-03-22
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 訪  問(wèn)  量:1726

詳細(xì)介紹

品牌其他品牌應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)


實(shí)驗(yàn)原理

MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽)是一種黃色水溶性化合物,可被活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶還原為藍(lán)紫色不溶性甲臜(Formazan)結(jié)晶2。甲臜結(jié)晶量與活細(xì)胞數(shù)量成正比,通過(guò)DMSO溶解后可用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度值,間接反映細(xì)胞增殖狀態(tài)

實(shí)驗(yàn)材料

  • ?細(xì)胞樣本?:對(duì)數(shù)生細(xì)胞(70-80%融合度)

  • ?主要試劑?:

    • MTT溶液(5mg/mL,PBS配制)

    • DMSO(分析純)

    • 培養(yǎng)基(含10%胎牛血清)

  • ?儀器設(shè)備?:

    • 96孔細(xì)胞培養(yǎng)板

    • CO?培養(yǎng)箱

    • 酶標(biāo)儀(檢測(cè)波長(zhǎng)490nm)

實(shí)驗(yàn)步驟

細(xì)胞接種

  1. 消化收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞,血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)

  2. 96孔板每孔接種100μL細(xì)胞懸液(密度1×103-1×10?個(gè)/孔)

  3. 邊緣孔用無(wú)菌PBS填充減少蒸發(fā)干擾

藥物處理

  1. 細(xì)胞貼壁后(通常24小時(shí)),加入不同濃度待測(cè)藥物

  2. 每個(gè)濃度設(shè)3-5個(gè)復(fù)孔

  3. 37℃、5% CO?繼續(xù)培養(yǎng)12-48小時(shí)

MTT染色

  1. 每孔加入10μL MTT溶液(終濃度0.5mg/mL)

  2. 繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)

  3. 小心吸棄上清(懸浮細(xì)胞需先離心)

甲臜溶解

  1. 每孔加入100-150μL DMSO

  2. 低速振蕩10分鐘使結(jié)晶充分溶解

檢測(cè)分析

  1. 酶標(biāo)儀490nm波長(zhǎng)測(cè)定各孔OD值

  2. 計(jì)算抑制率:[(對(duì)照組OD-實(shí)驗(yàn)組OD)/對(duì)照組OD]×100%

關(guān)鍵參數(shù)優(yōu)化

  • ?細(xì)胞接種數(shù)?:根據(jù)增殖速度調(diào)整(快速增殖細(xì)胞可減少至1×103個(gè)/孔)

  • ?MTT反應(yīng)時(shí)間?:2-4小時(shí)(時(shí)間過(guò)長(zhǎng)易產(chǎn)生毒性)

  • ?檢測(cè)范圍?:OD值控制在0-0.7之間線性關(guān)系




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