小鼠脾臟單細胞懸液的制備方法
更新時間:2026-03-31 點擊次數(shù):1602
1. 8周齡C57BL/6小鼠摘眼球放血。
2. 在75%的酒精中,浸泡5min。
3. 無菌狀態(tài)下取脾臟。
4. 取一干凈10cm大皿,放入無菌的70um濾網(wǎng),將脾臟置于濾網(wǎng)上,加入2ml培養(yǎng)基。
5. 用研磨棒輕輕研磨臟器,將脾臟組織研磨成單細胞狀態(tài),直到只剩下臟器的結締組織為止。
6. 研磨時動作應輕柔,用力過大可導致細胞死亡。
7. 棄去濾網(wǎng)和濾網(wǎng)上的結締組織,收集平皿內的細胞懸液,400g4min離心沉淀。
8. 用PBS重懸沉淀,就可以進行后續(xù)實驗。
小鼠脾臟是重要的免疫器官,位于左側腹腔、靠近胃的左側,呈長橢圓狀、暗紅色,質地柔軟,富含淋巴細胞、巨噬細胞等各類免疫細胞及實質細胞。小鼠脾臟單細胞懸液制備的核心原理是:通過無菌操作獲取完整脾臟組織,去除表面結締組織和脂肪后,采用機械研磨結合酶解(或單純機械研磨)的方式,將脾臟組織分散為單個細胞,經(jīng)過濾去除組織碎片、紅細胞裂解去除雜細胞、離心洗滌純化,最終獲得高活率、高純度的單細胞懸液。該方法適用于流式細胞術分析、細胞培養(yǎng)、Western blot、單細胞測序、免疫功能檢測等各類實驗,操作的關鍵在于全程保持無菌環(huán)境、控制酶解條件,減少細胞損傷,確保細胞活性和純度,避免細胞聚集或污染。