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(1)有柱式分選-陽性分選(磁珠標記的細胞為目的細胞)
① 磁珠標記:樣品與磁珠孵育15min左右;
② 陰性組分先行流出:孵育后的樣品過柱處理,標記磁珠的細胞在磁場的作用下吸附到MACS分選柱子上,沒有被標記的細胞(陰性組分)先行流到試管中;
③ 洗脫陽性組分:把MACS分選柱子從磁分選器上拿下來,這時磁珠是沒有磁力的,故洗脫獲得陽性組分,收集后用于做后續實驗。
用特異性抗體標記磁珠結合目標細胞
通過磁場分離:標記細胞被吸附在管壁,未標記細胞流出
兩種策略:
陽性分選:直接選目標細胞(純度高)
陰性分選:去除雜細胞,保留目標(活性更好)
小鼠脾臟、淋巴結、胸腺
外周血(PBMC)
骨髓
肺 / 腦 / 腫瘤組織單細胞懸液
組zhi剪碎 → 研磨 / 濾網過濾 → 離心
紅細胞裂解(脾臟 / 血樣本必須)
重懸于分選緩沖液(PBS+0.5%BSA+2mMEDTA)
計數,調整細胞濃度
取 10? 細胞,離心棄上清
加入磁珠抗體,4℃ 避光孵育 15–20 min
每 1–2 mL 緩沖液洗滌,離心去未結合磁珠
細胞重懸后加入分選柱 / 分選管
置于磁力架上
收集流出液(陰性組分)
移出磁力架,用緩沖液沖洗,收集洗脫液(陽性組分)
流式細胞術檢測純度
臺盼藍測活率
可直接用于:培養、刺激、WB、qPCR、測序等
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