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Brdu免疫熒光染色

簡要描述：Brdu免疫熒光染色 BrdU是另外一種胸腺嘧啶核苷類似物。它也能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復制的DNA分子，通過基于EdU與Apollo熒光染料的特異性反應檢測DNA復制活性，通過檢測EdU標記便能地反映細胞的增殖情況。

更新時間：2026-03-20
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實驗技術服務

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一、原理

BrdU（溴脫氧尿苷）是胸腺嘧啶類似物，可在S 期摻入新合成 DNA。

通過抗 BrdU 抗體 + 熒光二抗標記，熒光陽性細胞 = 正在增殖 / 近期增殖的細胞。

二、適用樣本

細胞爬片（體外培養細胞）
冰凍切片 / 石蠟切片（小鼠腦組織、腫瘤、腸黏膜、肝臟等）

三、標準實驗步驟（免疫熒光法）

1. BrdU 標記

細胞：加入終濃度 10–50 μM BrdU，孵育 2–24 h
動物：腹腔注射 50–100 mg/kg，2 h 后取材

2. 固定

4% PFA 固定 15–30 min → PBS 洗

3. 通透與變性（關鍵步驟）

0.2% Triton X-100 通透 10 min
2N HCl 37℃ 變性 30 min（解開 DNA 雙鏈，暴露 BrdU）
0.1M 硼酸鈉中和 10 min

4. 封閉

10% 山羊血清室溫封閉 1 h

5. 一抗孵育

Mouse anti-BrdU 一抗

4℃ 過夜

6. 熒光二抗

FITC/PE/Cy3 熒光二抗

室溫避光 1 h

7. 復染與封片

DAPI 染核（藍色）

抗熒光淬滅封片

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Brdu免疫熒光染色

一、原理

二、適用樣本

三、標準實驗步驟（免疫熒光法）

1. BrdU 標記

2. 固定

3. 通透與變性（關鍵步驟）

4. 封閉

5. 一抗孵育

6. 熒光二抗

7. 復染與封片

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