Edu染色服務(wù)

簡要描述：Edu染色服務(wù)：EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物，它們能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶滲入正在復(fù)制的DNA分子，然后分別利用免疫熒光技術(shù)、與Apollo熒光染料特異性反應(yīng)檢測細胞增殖情況。這是一種新型的非放射性同位素細胞增殖檢測的方法，在細胞培養(yǎng)，實體組織及臨床研究中得到了廣泛的應(yīng)用。

更新時間：2026-03-20
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實驗技術(shù)服務(wù)

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Edu染色服務(wù)：實驗步驟

1.將處于對數(shù)生的各實驗組細胞**消化后，培養(yǎng)基重懸成細胞懸液，并計數(shù)。

2.根據(jù)細胞生長快慢決定鋪板細胞密度，每組3-5重復(fù)，根據(jù)實驗設(shè)計決定鋪板數(shù)量。

3.統(tǒng)一鋪好后，待細胞沉淀下來后，在顯微鏡下觀察各實驗組的細胞密度，如果密度不均勻，則固定一組，微調(diào)其他組細胞的量再次鋪板(如:發(fā)現(xiàn)NC組細胞較多，降低細胞量再次鋪板)，放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4.鋪板后天與第四天，配制2X(20uM)的EDU工作液,將37℃預(yù)熱的2X的EDU工作液等體積加入96孔板中，是EDU終濃度變?yōu)?X，繼續(xù)孵育細胞2小時，EDU標記細胞完成后，去除培養(yǎng)液，并加入1mL固定液，室溫固定15分鐘，去除固定液，每孔用1mL洗滌液洗滌細胞3次，每次3-5分鐘，去除洗滌液，每孔用1mL通透液，室溫孵育10-15分鐘，去除通透液，每孔用1mL洗滌液洗滌細細胞1-2次，每次3-5分鐘。用內(nèi)源性過氧化物酶封閉液室溫孵育20分鐘，用洗滌液洗滌3次，每次3-5分鐘。

5.EDU檢測:每孔加入50uL的Click反應(yīng)液，室溫避光孵育30分鐘，吸出反應(yīng)液，用洗滌液洗滌3次，每次3-5分鐘。

6.樣品的顯色 :在樣品上加Streptavidin-HRP工作液，室溫孵育30分鐘。用洗滌液洗滌3次，每次2分鐘。加入0.1ml TMB顯色液，室溫孵育5-30分鐘或根據(jù)顯色情況孵育適當(dāng)時間。直接在370nm或620-650nm測定吸光度。或加入25微升2M 終止反應(yīng)，隨后在450nm測定吸光度。

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