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原位雜交實驗步驟:前期胚胎的制備。
原位雜交**天進行重新水化和固定、預雜交、雜交。
原位雜交第二天進行1將探針回收,放于-20C保存(通常探針可重復使用十次左右)2加入50%甲酰按/2XSSCT溶液1量升,60℃,放置30分鐘,重復一次。3署換2XSSCT1ml,60°℃,放置15分鐘。4詈換0.2XsSCT1ml,60℃,放置30分鐘,重復一次。5用MABT洗兩次,每次五分鐘,放在搖床輕輕搖動。6室溫下加1ml 1:2:7溶液,時間為一小時。7 按1:3000的比例在1∶2:7溶液中加入酶連**抗體,40冰箱過夜。
原位雜交第三天進行1)用1ml含10%熱滅**清的MABT溶液置換抗體溶液,放置搖床上25分鐘,然后用1mIMABT置換,25分鐘,再用1mIMABT溶液詈換,一小時以上,后用1mIMABT溶液置換,25分鐘。2用1ml 1mM米勝的Staining buffer洗一次,每次放置五分鐘。3)將胚胎轉入十六孔板中,吸去stainingbuffer,加上300ul BM Purple AP Substrate(底物,用之前加5mM米唑),十六孔板外面包,上錫箔紙以避光,避免搖動,室溫下顯色。4)每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色5)將顯色的胚胎中的底物吸出,用
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