
簡要描述:免疫共沉淀:是一種利用抗原抗體相互作用的免疫學(xué)原理來研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典實驗方法,它可以確定兩種蛋白在完整細胞內(nèi)生理條件下是否存在相互作用。
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免疫共沉淀實驗步驟:
1.試劑準備,樣品收集
2.免疫沉淀反應(yīng)后,在進行電泳
3.通過免疫共沉淀確定結(jié)合蛋白
免疫共沉淀:是一種利用抗原抗體相互作用的免疫學(xué)原理來研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典實驗方法,它可以確定兩種蛋白在完整細
胞內(nèi)生理條件下是否存在相互作用。
細胞用溫和非變性裂解液裂解,離心取上清
加入Protein A/G 磁珠預(yù)清除非特異性結(jié)合
加入目標蛋白一抗或 IgG 對照,4℃ 孵育過夜
加入 Protein A/G 磁珠,4℃ 結(jié)合 2–4 h
洗滌磁珠,去除雜蛋白
煮沸洗脫,進行 Western blot 檢測互作蛋白
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