一、常用動(dòng)物選擇與特點(diǎn)

二、核心菌株與培養(yǎng)

• 標(biāo)準(zhǔn)株：M129、FH、ATCC29342（常用，致病性穩(wěn)定）

• 培養(yǎng)：SP-4/PPLO 液體培養(yǎng)基（含 10–20% 血清、酵母浸膏），37℃培養(yǎng) 5–7 天，至培養(yǎng)基由紅變黃；CCU（顏色變化單位） 或 CFU 定量，常用濃度：10?–10? CCU/mL

三、主流建模方法（按常用度排序）

1. 鼻腔滴入法（常用，模擬自然感染）

• 操作：小鼠麻醉后，50 μL / 只（10? CCU/mL）滴鼻，保持頭仰位 1–2 min，讓菌液吸入肺內(nèi)；可連續(xù)滴鼻 2–3 天提高定植率

• 特點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好、接近人感染途徑；缺點(diǎn)是菌液易流失，肺部劑量不均

2. 氣管內(nèi)注射法（、感染率高）

• 操作：麻醉后固定，hou

  鏡暴露聲門，微量注射器經(jīng)氣管注入30–50 μL菌液，確保進(jìn)入下呼吸道

• 特點(diǎn)：肺部劑量、感染一致；適合定量研究，但操作難度高

3. 霧化吸入法（群體建模、均勻感染）

• 操作：密閉霧化箱，超聲霧化菌液（10? CCU/mL），動(dòng)物自由吸入 15–20 min

• 特點(diǎn)：適合大樣本、感染均勻；設(shè)備要求高、濃度控制難

4. 其他方法

• 支氣管肺泡灌洗接種：定位肺泡，適合局部感染研究

• 合并感染模型：MP + 流感病毒 / 細(xì)菌，模擬臨床重癥混合感染

四、標(biāo)準(zhǔn)建模流程（以 BALB/c 小鼠為例）

1. 動(dòng)物準(zhǔn)備：6–8 周齡 SPF 級(jí) BALB/c，適應(yīng)性飼養(yǎng) 1 周，雌雄各半

2. 菌液制備：MP M129 株在 SP-4 培養(yǎng)基培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期，離心濃縮，調(diào)整至1×10? CCU/mL

3. 麻醉與接種：yi氟烷吸入麻醉，50 μL / 只滴鼻，每日 1 次，連續(xù) 2 天

4. 飼養(yǎng)觀察：感染后每日監(jiān)測(cè)體重、呼吸、活動(dòng)、咳嗽；第 7–14 天為病變高峰期

5. 樣本采集：處死取肺組織（左肺病理、右肺病原定量）、血清、BALF

五、模型評(píng)價(jià)指標(biāo)（準(zhǔn)組合）

1. 臨床癥狀

• 體重下降、精神萎靡、呼吸急促、咳嗽、皮毛粗糙；體重下降≥10% 提示感染成功

2. 病原學(xué)檢測(cè)（確診）

• 肺組織 MP 定量：qPCR 檢測(cè) MP-16S rRNA/ATPase 基因；或 CCU 法計(jì)數(shù)活菌量

• BALF 涂片 / 培養(yǎng)：吉姆薩染色見支原體，或培養(yǎng)基變色

3. 病理組織學(xué)（核心）

• 大體：肺葉充血、水腫、實(shí)變、灶性灰白色病灶

• 鏡下：間質(zhì)性肺炎（肺泡間隔增寬、淋巴細(xì)胞 / 巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)）、支氣管周圍炎、上皮細(xì)胞壞死脫落；可做病理評(píng)分（0–4 分）量化 severity

4. 免疫與炎癥指標(biāo)

• 血清：IL-6、TNF-α、IFN-γ 升高；MP 特異性 IgM/IgG 抗體陽(yáng)性

• BALF：細(xì)胞總數(shù)↑、淋巴細(xì)胞 / 巨噬細(xì)胞比例↑

• 免疫組化：MP 抗原定位、炎癥因子（如 IL-1β）表達(dá)

六、常見問題與優(yōu)化

• 感染率低：提高菌液濃度（10?–10?）、連續(xù)接種 2–3 天、選擇敏感株（M129）

• 病變不均：改用氣管內(nèi)注射、控制麻醉深度、確保菌液吸入

• 背景高 / 污染：嚴(yán)格 SPF 環(huán)境、培養(yǎng)基加抗生素（青mei素 / 鏈mei素，不影響 MP）

• 模型不穩(wěn)定：固定菌株、接種劑量、日齡、性別，減少變量