大鼠組織HE染色實驗標(biāo)準(zhǔn)流程

?一、樣本前處理?

1. ?組織固定?

• 取材后立即浸泡于4%多聚甲醛（4℃），固定時間≥48小時

• 特殊組織（如骨/軟骨）需EDTA脫鈣4周

2. ?脫水與透明?

• 梯度乙醇脫水：75%→85%→90%→95%→無水乙醇（每步30分鐘~4小時）

• 二甲苯透明：2次×10分鐘

3. ?石蠟包埋?

• 浸蠟：3次×1小時（60℃石蠟）

• 包埋后4℃定型≥10小時

?二、切片與貼片?

1. ?切片制備?

• 厚度5 μm，45℃恒溫水浴攤片

• 37℃烤箱烤干（防脫片）

?三、HE染色步驟?

1. ?脫蠟與水化?

• 二甲苯脫蠟：3次×5分鐘

• 梯度乙醇水化：無水乙醇→90%→80%→70%→純水（每步5分鐘）

2. ?核質(zhì)染色?

• 蘇木精染色：5~10分鐘

• 分化：1%鹽酸酒精5~10秒，流水返藍(lán)10分鐘

3. ?胞質(zhì)染色?

• 伊紅染色：10秒~2分鐘（根據(jù)組織類型調(diào)整）

4. ?脫水與封片?

• 快速梯度乙醇脫水（80%→95%→無水乙醇）

• 二甲苯透明，中性樹膠封片

?四、結(jié)果觀察?

• ?顯微鏡設(shè)置?：

• 常用放大倍數(shù)：200×（海馬組織）、400×（脊髓/肺組織）

• 標(biāo)尺標(biāo)注：如20 μm（脊髓切片）

• ?典型結(jié)構(gòu)?：

• 細(xì)胞核（藍(lán)色）、胞質(zhì)/膠原（粉紅色）

關(guān)鍵注意事項

1. ?質(zhì)量控制?

• 避免切片褶皺或脫片（烤片時間需充足）

• 分化時間控制，防止過染

2. ?特殊組織處理?

• 神經(jīng)組織需縮短伊紅染色時間（防止過深）

• 肌腱/軟骨注意脫鈣完整性

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