雙熒光素酶報告基因檢測實驗服務是一種廣泛應用于分子生物學研究的技術服務，主要用于基因表達調控、miRNA靶基因驗證、啟動子活性分析等領域
。以下是該服務的核心內容和技術要點：

一、服務內容

1. ?miRNA靶基因驗證?

• 將預測的mRNA/lncRNA靶序列插入報告基因載體，通過熒光素酶活性變化驗證miRNA的靶向作用

• 常用載體：psiCHECK2（R-Luc 3'UTR插入靶序列，F-Luc作內參）

2. ?啟動子活性分析?

• 通過截短或突變啟動子區域（通常2kb片段），檢測熒光素酶活性變化以確定功能區域

• 常用載體：pGL3-Basic（F-Luc上游插入啟動子）

3. ?轉錄因子調控驗證?

• 共轉染轉錄因子表達載體與啟動子報告載體，通過活性變化分析調控關系

4. ?ceRNA機制研究?

• 驗證lncRNA/circRNA通過競爭miRNA調控靶基因的表達

二、實驗流程

1. ?載體構建?：將目標序列（如啟動子、UTR等）克隆至報告載體

2. ?細胞轉染?：使用高效轉染試劑（如LipoFiter）或病毒系統

3. ?雙熒光檢測?：

• 裂解細胞后，依次加入LARII（測F-Luc活性）和STOP&GLO Reagent（測R-Luc活性）

4. ?數據分析?：以F-Luc/R-Luc比值校正轉染效率，計算相對活性

三、服務優勢

• ?預測支持?：部分提供商免費提供實驗前的結合位點預測服務

• ?定制化方案?：可針對不同樣本定制質粒或miRNA mimics

• ?高靈敏度檢測?：采用均質法輝光型試劑盒（如Promega），減少操作誤差

四、應用案例

• ?案例1?：驗證某miRNA抑制靶基因表達，熒光素酶活性下降50%以上

• ?案例2?：發現轉錄因子X通過結合啟動子Y的-500bp區域增強表達

五、注意事項

• 實驗需設置背景對照、陰性對照及陽性對照

• 使用底部透明的96孔板以避免轉板誤差